不同PCR技術(shù)該怎么選？這些關(guān)鍵點(diǎn)要注意！
更新時(shí)間：2023-06-16 | 點(diǎn)擊率：943
聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于基因分析、疾病診斷和生物學(xué)研究、生物學(xué)檢測(cè)等過(guò)程中。
隨著科學(xué)的發(fā)展，PCR的變種技術(shù)也不斷涌現(xiàn)。
本文將介紹PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR（qPCR）和數(shù)字PCR（dPCR）這三種方法的區(qū)別。
普通的PCR是一種在體外擴(kuò)增特定DNA序列的技術(shù)。它包括三個(gè)步驟：變性、退火和延伸。通過(guò)使用引物、DNA模板和DNA聚合酶，可以在熱循環(huán)過(guò)程中多次復(fù)制目標(biāo)DNA，從而快速擴(kuò)增特定片段。
qPCR是PCR的實(shí)時(shí)熒光變種。它通過(guò)在PCR過(guò)程中引入熒光探針，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增反應(yīng)的進(jìn)程。這種熒光探針與目標(biāo)DNA序列的特定區(qū)域結(jié)合，當(dāng)DNA擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)增加時(shí)，可以定量測(cè)量目標(biāo)DNA的存在量。
dPCR通過(guò)將PCR反應(yīng)分割成許多微小反應(yīng)，使每個(gè)反應(yīng)中只包含少量的DNA分子。通過(guò)計(jì)數(shù)陽(yáng)性和陰性反應(yīng)的數(shù)目，可以對(duì)目標(biāo)DNA的存在進(jìn)行定量。dPCR通常使用熒光探針等來(lái)標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)物。
基本原理是將稀釋后的核酸溶液，分散至芯片的微反應(yīng)器或者微滴當(dāng)中，每個(gè)反應(yīng)器僅含有微量的核酸模板數(shù)。經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增之后，有一個(gè)核酸分子的模板的反應(yīng)器就會(huì)發(fā)出熒光信號(hào)，沒(méi)有模板的反應(yīng)器沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。
檢測(cè)方法：PCR和qPCR都是間接檢測(cè)方法，依賴于熒光探針或染料的結(jié)合和信號(hào)產(chǎn)生。而dPCR是直接計(jì)數(shù)陽(yáng)性和陰性反應(yīng)的數(shù)目，不需要參考標(biāo)準(zhǔn)曲線或標(biāo)準(zhǔn)樣品。
定量精度：qPCR具有較高的定量精度，可以準(zhǔn)確測(cè)量目標(biāo)DNA的存在量。dPCR則具有更高的精確性和靈敏度，可以實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量，但對(duì)樣本量的需求較高。
靈敏度：dPCR通常比qPCR更敏感，能夠檢測(cè)低豐度的目標(biāo)DNA。
成本和復(fù)雜度：PCR和qPCR的成本相對(duì)較低，儀器設(shè)備和試劑較為普及。而dPCR需要更高的投入成本，并且設(shè)備和操作相對(duì)復(fù)雜。
樣本處理：qPCR通常需要對(duì)樣本進(jìn)行前處理，如提取和純化DNA，以獲得較好的擴(kuò)增效果。而dPCR對(duì)樣本的處理要求較低，可以直接使用復(fù)雜的樣本。
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